測(cè)定食品中的順丁烯二酸與順丁烯二酸酐總量
1. 適用范圍： 本檢驗(yàn)方法適用于順丁烯二酸酐淀粉及其製品中順丁烯二酸(maleic acid) 與順丁烯二酸酐(maleic
anhydride)總量之檢驗(yàn)。
2. 檢驗(yàn)方法： 檢體經(jīng)萃取、皂化后，以高效液相層析儀(high performance liquid chromatograph, HPLC)分析之方法。
2.1. 裝置：
2.1.1. 高效液相層析儀：
2.1.1.1. 檢出器：光二極體陣列檢出器(photodiode array detector) 。
2.1.1.2. 層析管：GL Sciences InertSustain C18，5 ?m，內(nèi)徑 4.6 mm × 25 cm，或同級(jí)品。
2.1.2. 振盪器(Shaker) 。
2.1.3. 酸鹼度測(cè)定儀(pH meter) 。
2.2. 試藥：甲醇採用液相層析級(jí);磷酸(85%) 、鹽酸及氫氧化鉀均採用采試藥特級(jí);去離子水(比電阻于25?C 可達(dá)18 MΩ.cm 以上) ;順丁烯二酸對(duì)照用標(biāo)準(zhǔn)品。
2.3. 器具及材料：
2.3.1. 容量瓶：50 mL 及100 mL。
2.3.2.離心管：50 mL， PP材質(zhì)。
2.3.3. 濾膜：孔徑0.22 μm，PVDF 材質(zhì)。
2.4. 試劑之調(diào)制：
2.4.1. 50% 甲醇溶液：取甲醇250 mL，加去離子水使成500 mL。
2.4.2. 5N鹽酸溶液：
取去離子水50 mL ，徐徐加入鹽酸42 mL ，混勻冷卻后，再加去離子水使成100 mL。
2.4.3. 0.5N 氫氧化鉀溶液：稱取氫氧化鉀14 g ，以去離子水溶解使成500 mL。
2.4.4. 0.1%磷酸溶液：
取磷酸1.2 mL ，加去離子水使成1000 mL 。
2.5. 移動(dòng)相溶液之調(diào)製：
取0.1%磷酸溶液與甲醇以98：2 (v/v) 之比例混勻，經(jīng)濾膜過濾，取濾液供作移動(dòng)相溶液。
2.6. 標(biāo)準(zhǔn)溶液之配制：
取順丁烯二酸對(duì)照用標(biāo)準(zhǔn)品約100 mg，精確稱定，以去水溶解并定容至100 mL，作為標(biāo)準(zhǔn)塬液，冷藏儲(chǔ)存。臨用時(shí)精確量取適量標(biāo)準(zhǔn)原液，以去離子水稀釋至0.02 ～1.0g/mL，供作標(biāo)準(zhǔn)溶液。
2.7. 檢液之調(diào)制：
將檢體均質(zhì)或混勻后，取約1 g，精確稱定，置于離心管中，加50% 甲醇溶液25 mL ，振盪30分鐘后，加0.5N 氫氧化鉀溶液20 mL ，混勻，靜置2 小時(shí)。加5N鹽酸溶液約3 mL，使呈酸性，以去離子水定容至 50 mL 。靜置后，取上清液 100 L (a) ，加去離子水使成1000 ? L (b)，混勻后，經(jīng)濾膜過濾，供作檢液。
2.8. 鑒別試驗(yàn)及含量測(cè)定：
精確量取檢液及標(biāo)準(zhǔn)溶液各20 μ L，分別注入高效液相層析儀中，依下列條件進(jìn)行液相層析，就檢液與標(biāo)準(zhǔn)溶液所得波峰之滯留時(shí)間及吸收?qǐng)D譜比較鑑別之，并依下列計(jì)算式求出檢體中順丁烯二酸與順丁烯二酸酐之總量(ppm)
( 注)：
檢體中順丁烯二酸與順丁烯二酸酐之總量(ppm) =MF × V× C
C：由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得順丁烯二酸之濃度( ?g/mL)
V：檢體定容之體積(mL)
M：取樣分析檢體之重量(g)
F ：稀釋倍數(shù)，由b/a求得
注：順丁烯二酸與順丁烯二酸酐之總量，以順丁烯二酸計(jì)。
高效液相層析測(cè)定條件(注)：
光二極體陣列檢出器：波長214 nm。
層析管：GL Sciences InertSustain C18，5 ?m，內(nèi)徑 4.6 mm ×25 cm。
移動(dòng)相溶液：依2.5.節(jié)調(diào)製之溶液。
移動(dòng)相流速：1 mL/min 。
注：1. 所採用之層析管應(yīng)有效將順丁烯二酸與反丁烯二酸(fumaric acid)、醋酸、蘋果酸(malic acid)及琥珀酸(succinic acid) 等分離。
2. 上述測(cè)定條件分析不適時(shí)，依所使用之儀器，設(shè)定適合之測(cè)定條件。
附注：食品中有影響檢驗(yàn)結(jié)果之物質(zhì)時(shí)，應(yīng)自行探討。
