方法名稱： 維生素K1的測(cè)定—高效液相色譜法

　　應(yīng)用范圍： 本方法采用高效液相色譜法測(cè)定維生素K1的含量。

　　本方法適用維生素K1。

　　方法原理： 供試品和內(nèi)標(biāo)均制成流動(dòng)相溶液，進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)254nm處檢測(cè)維生素K1（C31H46O2）和內(nèi)標(biāo)鄰苯二甲酸二甲酯的吸收值，計(jì)算出其含量。

　　試劑：

　　1.石油醚

　　2. 正己烷

　　儀器設(shè)備：

　　1. 儀器

　　1.1 高效液相色譜儀

　　1.2 色譜柱

　　硅膠為填充劑，維生素K1的順、反式異構(gòu)體之間及順式異構(gòu)體峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。

　　1.3 紫外吸收檢測(cè)器

　　2. 色譜條件

　　2.1 流動(dòng)相：正己烷+石油醚=2.5 2000

　　2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm

　　2.3 柱溫：室溫

　　試樣制備：

　　1. 稱取供試品

　　取本品20mg，精密稱定，置50mL量瓶中。

　　2. 對(duì)照品溶液的制備

　　精密稱取維生素K1對(duì)照品適量，與供試品同法配制。

　　3. 內(nèi)標(biāo)溶液的制備

　　取苯甲酸膽甾酯37.5mg，置25mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，即得。

　　4. 供試品溶液的制備

　　上述供試品加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液5mL與內(nèi)標(biāo)溶液各1mL，置10mL量瓶中，以流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

　　注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一?！熬芰咳　毕抵噶咳◇w積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

　　操作步驟： 分別精密吸取上述供試品溶液與對(duì)照品溶液，10μL 注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)254nm處測(cè)定維生素K1和內(nèi)標(biāo)苯甲酸膽甾酯的吸收值，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得 [2] 。