由于各種菌對藥物的敏感性不同，產(chǎn)生的抑菌環(huán)大小不同，如果菌種不純，試驗(yàn)中所產(chǎn)生的抑菌環(huán)大小與該菌種在純培養(yǎng)狀態(tài)下產(chǎn)生的抑菌環(huán)大小存在較大的差異，影響判斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此需要對各種致病菌提純后，分別進(jìn)行不同的藥敏試驗(yàn)。藥敏試驗(yàn)時(shí)，需要將提純后的菌種配制成一定濃度的菌液。WHO組織制定的標(biāo)準(zhǔn)是要求菌液濃度在1．5億/ml 左右。若菌液濃度過高，該菌會對所有藥物產(chǎn)生耐藥；反之，菌液濃度過低，該菌會對所有藥物均敏感。最精確的方法是使用分光光度計(jì)測定新鮮培養(yǎng)物菌懸液的吸光度，來確定菌液濃度。國家細(xì)菌耐藥性監(jiān)測網(wǎng)的三級甲等醫(yī)院，其微生物實(shí)驗(yàn)室大多數(shù)用此法來確定藥敏試驗(yàn)的菌液濃度。

　　藥敏試驗(yàn)中要將菌液均勻地涂在培養(yǎng)基上，使細(xì)菌均勻分布，這樣才能使試驗(yàn)結(jié)果不會出現(xiàn)較大的偏差。涂菌后15min才能貼藥敏紙片。由于涂菌后，細(xì)菌要有一段時(shí)間的適應(yīng)過程，但是時(shí)間不能過長，否則會使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥。貼藥敏紙片時(shí)，每取一種藥敏紙片必須燒一下鑷子口，避免藥敏紙片之間相互混淆，以提高藥敏的準(zhǔn)確性。藥物殺滅細(xì)菌存在一定的量比，藥敏試驗(yàn)培養(yǎng)基上細(xì)菌層越厚抑菌圈就越小，反之抑菌圈就越大。根據(jù)一種藥物抑菌圈的有無或者大小，只能判斷出該藥對細(xì)菌有沒有效果，但其敏感性的高低需要通過科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)來確定。藥物的敏感程度需要根據(jù)藥敏試驗(yàn)的結(jié)果，并結(jié)合以上因素做綜合分析，才能得出科學(xué)的結(jié)論，而片面地根據(jù)藥敏圈的大小來決定敏感與否，結(jié)果不夠準(zhǔn)確。