由于在自然界生命活動(dòng)中起重要作用的蛋白質(zhì)在機(jī)體細(xì)胞內(nèi)的濃度比較低，并且存在于細(xì)胞的各個(gè)機(jī)構(gòu)中的蛋白質(zhì)幾乎都是以復(fù)雜的混合形式存在的。為了在不破壞蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)及一級(jí)結(jié)構(gòu)，和不影響其生理功能的情況下，把蛋白質(zhì)分離、純化出來(lái)，需要使用一些技術(shù)，如重組蛋白純化技術(shù)。疏水相互作用層析法是蛋白分離純化的一種方法。
制備高純度的藥用蛋白，必須依靠先進(jìn)的分離技術(shù)，層析技術(shù)具有分離效率高、條件溫和、選擇性強(qiáng)、操作方便等優(yōu)點(diǎn)，是生物大分子分離純化最有效的手段之一。蛋白質(zhì)具有蛋白表面疏水性的特性，蛋白表面疏水性對(duì)于維持蛋白質(zhì)的穩(wěn)定構(gòu)象及生物活性有著重要作用，同時(shí)又是疏水作用為主的層析分離蛋白質(zhì)方法的重要依據(jù)。疏水相互作用層析法，可以根據(jù)生物分子的疏水性強(qiáng)弱差異而實(shí)現(xiàn)分離純化，己經(jīng)被廣泛地用于重組蛋白分離和重組蛋白純化等。
疏水相互作用層析法（HIC法）的進(jìn)行重組蛋白純化的機(jī)理如下：生物分子表面的疏水基團(tuán)在高鹽濃度下逐漸暴露，通過(guò)疏水相互作用與介質(zhì)的疏水配基結(jié)合；鹽濃度下降，分子表面水化程度增加，導(dǎo)致疏水相互作用減弱，從而實(shí)現(xiàn)洗脫。
在蛋白質(zhì)的整體結(jié)構(gòu)中，疏水性氨基酸殘基往往存在于蛋白質(zhì)的內(nèi)部，少數(shù)的也出現(xiàn)在蛋白質(zhì)的表面，而疏水相互作用層析是根據(jù)蛋白質(zhì)親水疏水的性質(zhì)進(jìn)行分離的。高濃度鹽的水溶液中蛋白在柱上保留，在低鹽或水溶液中蛋白從柱上被洗脫，因此特別適用于濃硫酸銨溶液沉淀分離后的母液以及該沉淀用鹽溶解后含有目標(biāo)產(chǎn)品的溶液直接加樣到柱上，也適用7 mol/L 鹽酸胍或8mol/L 脲的大腸桿菌治療蛋白提取液直接加樣到柱上，在分離的同時(shí)也對(duì)其進(jìn)行了復(fù)性。疏水層析具有較少使多肽變性的特點(diǎn)。美迪西提供重組蛋白純化服務(wù)，可以為客戶在蛋白表達(dá)純化方面提供多種選擇，包括從方案設(shè)計(jì)、基因優(yōu)化、表達(dá)條件優(yōu)化到純化的技術(shù)體系，以提高客戶的目的蛋白表達(dá)水平。
不同類型鹽離子與蛋白質(zhì)作用時(shí)釋放水分子的情況不同，不同鹽類在疏水層析中增強(qiáng)蛋白疏水作用的強(qiáng)弱順序：Na2S04>K2S04>(NH4)2S04>Na2HP04>NaCI>NH4CI>NaBr>NaSCN。疏水相互作用是疏水相互作用層析法（HIC法）分離的理論基礎(chǔ)，蛋白質(zhì)的表面疏水性大小決定了疏水層析過(guò)程蛋白質(zhì)的保留行為，因此通過(guò)分析蛋白質(zhì)在HIC柱上的容量因子，還可以間接反映蛋白質(zhì)的表面疏水性強(qiáng)弱。
如有研究者采用疏水相互作用層析分離重組人干擾素α2b，去除干擾素樣品中的二聚體，得到高純度的干擾素用于進(jìn)一步的研究[1]。首先采用陽(yáng)離子交換層析純化復(fù)性重組人干擾素α2b，去除了大部分的雜蛋白，然后采用疏水相互作用層析純化重組人干擾素α2b，去除復(fù)性過(guò)程中產(chǎn)生的錯(cuò)誤折疊體和二聚體，并考察鹽濃度、pH值、流速和洗脫液中尿素對(duì)疏水相互作用層析純化效果的影響。該研究者確定了疏水層析純化重組人干擾素α2b的最優(yōu)條件，成功提取到具有高活性、高純度的重組人干擾素α2b純品。
疏水相互作用層析法雖然在蛋白分離和蛋白純化上具有一定的作用，但是同時(shí)也存在一些不足之處。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，目前對(duì)于對(duì)蛋白質(zhì)的研究也是日益深入。當(dāng)研究某一種蛋白質(zhì)的功能，需要進(jìn)行重組蛋白純化時(shí)，應(yīng)在了解目的蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)的基礎(chǔ)上，根據(jù)不同分離技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)相結(jié)合使用最佳的分離工藝以便得到濃度高、純度高的物質(zhì)，進(jìn)而得到較好的效果。
[1] 疏水相互作用層析分離重組人干擾素α2b[J].
