舊儀器拖累數(shù)據(jù)？自動化血細胞檢測技巧+Countess儀器以舊換新優(yōu)惠

賽默飛生命科學(xué)

2025.3.26

在處理PBMC（外周血單個核細胞）樣本時，需特別注意這類細胞的獨特性質(zhì)。

太長不讀版

Countess 3通過深度學(xué)習(xí)算法，基于多源PBMC樣本大數(shù)據(jù)訓(xùn)練，分析不同來源的PBMC樣本圖像特征，建立高精度識別模型，有效克服傳統(tǒng)方法中常見的：紅細胞誤判，血小板干擾，細胞碎片影響。
熒光技術(shù)可實現(xiàn)對PBMC的特異性染色，僅標(biāo)記有核細胞。該特性在處理含大量血小板、紅細胞或碎片的復(fù)雜樣本時，可顯著提升計數(shù)準(zhǔn)確性。
細胞計數(shù)儀以舊換新活動，不限制品牌，均可換至最新版的賽默飛Countess 3/3FL 自動細胞計數(shù)儀（活動二維碼在最后）

詳細分解版

從全血樣本中制備PBMC（外周血單個核細胞）需要技術(shù)人員具備高度熟練的靜脈穿刺、移液、洗滌、密度梯度制備和離心操作技能。樣本制備過程中任何步驟的誤差或操作不一致，都可能對最終細胞樣本的質(zhì)量及計數(shù)準(zhǔn)確性造成負面影響。

在評估PBMC的健康狀態(tài)時，可能會面臨諸多挑戰(zhàn)。血球計數(shù)板雖是測定細胞濃度的最常用工具，但該操作過程繁瑣，且結(jié)果易受操作者個體差異影響。此外，血液樣本成分復(fù)雜，含有多重干擾因素，使得人工計數(shù)尤為困難。采用自動細胞計數(shù)儀，可顯著提升結(jié)果準(zhǔn)確性，同時大幅節(jié)省人工計數(shù)所需時間。

挑戰(zhàn)：與穩(wěn)定細胞系相比，PBMC在明場顯微鏡下通常顯色較淺（圖1），即使使用臺盼藍染色，通過傳統(tǒng)血球計數(shù)板和顯微鏡仍難以準(zhǔn)確識別。

解決方案：Countess 3系列儀器可自動檢測最佳焦平面并優(yōu)化光照參數(shù)，顯著提升PBMC計數(shù)效果。為獲得最佳檢測結(jié)果，務(wù)必充分利用這些自動化功能。

圖1 臺盼藍染色的PBMC樣本。染色較淺（臺盼藍著色度弱），PBMC細胞體積較?。ㄖ睆?-12μm）。

挑戰(zhàn)：部分裂解液（包括氯化銨類緩沖液，如ACK裂解液）對細胞作用較強，處理后可能立即導(dǎo)致臺盼藍染色假陽性。紅細胞（RBCs）及狀態(tài)不佳的PBMC會因深染臺盼藍而被誤判為死細胞。

解決方案：為確保去除樣本中紅細胞并維持PBMC活性，建議采用Ficoll密度梯度離心方案。

挑戰(zhàn)：樣本采集和處理過程中的細胞裂解可能產(chǎn)生大量碎片干擾。

解決方案：Countess 3采用智能識別算法，基于多源PBMC樣本大數(shù)據(jù)訓(xùn)練，AI模型可精準(zhǔn)區(qū)分：有核細胞（目標(biāo)細胞），紅細胞（RBCs），血小板（圖2，3）。較傳統(tǒng)方法提升30%計數(shù)準(zhǔn)確率*。尤其適用于：外周血樣本，含高比例干擾物的復(fù)雜樣本。

注：數(shù)據(jù)來源于內(nèi)部對比測試

圖2. 機器學(xué)習(xí)算法可產(chǎn)生與流式細胞儀計數(shù)相當(dāng)?shù)母邷?zhǔn)確度細胞計數(shù)。使用Attune NxT流式細胞儀（紫色直方圖）、Countess 3 FL 自動細胞計數(shù)儀（紅色直方圖）對CHO-K1、HeLa、HEK293、Jurkat和人外周血單核細胞（PBMC）進行計數(shù)，并使用血球計數(shù)板和顯微鏡（灰色直方圖）進行手動計數(shù)。Countess 3 FL 自動細胞計數(shù)儀和血球計數(shù)板直方圖代表6次計數(shù)的平均值。誤差線表示6次獨立計數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)差。

圖3 Countess 3 智能算法可自動排除細胞碎片，減少干擾。Countess 3 算法智能排除，減少干擾。原始圖像中可見細胞碎片，橙色箭頭所指。

挑戰(zhàn)：在未裂解的全血樣本中，紅細胞數(shù)量可達PBMC的約1000倍，且存在大量雜質(zhì)，導(dǎo)致目標(biāo)細胞占比極低。

解決方案：建議通過以下步驟富集PBMC

采用密度梯度離心或裂解法去除紅細胞；
選用核特異性核酸染料（如Invitrogen吖啶橙、SYTO 9綠色熒光核酸染料或溴化乙錠同型二聚體-1）進行染色，確保僅標(biāo)記有核細胞。

注：使用上述熒光染料時需配套自動細胞計數(shù)器及相應(yīng)濾光片模塊。

明場與熒光細胞計數(shù)技術(shù)對比

在評估現(xiàn)有熒光細胞計數(shù)方案時，很多科研工作者會產(chǎn)生疑問：明場（BF）與熒光（FL）計數(shù)孰優(yōu)孰劣？這兩種歷經(jīng)數(shù)十年驗證的技術(shù)均被核心文獻列為可靠分析方法，其本質(zhì)差異在于：

技術(shù)優(yōu)勢對比

選擇性標(biāo)記能力

熒光技術(shù)可實現(xiàn)對PBMC的特異性染色（如采用吖啶橙、SYTO 9或溴化乙錠同型二聚體-1等核酸染料），僅標(biāo)記有核細胞。該特性在處理含大量血小板、紅細胞或碎片的復(fù)雜樣本時，可顯著提升計數(shù)準(zhǔn)確性（圖4）。相較而言，明場加臺盼藍染色會顯示所有細胞組分。