為什么要進行傳代培養(yǎng)
傳代培養(yǎng)通常是動物細胞培養(yǎng)才會用到的名詞,在植物組織培養(yǎng)過程中稱為繼代培養(yǎng)。通常植物組培的目的是快繁,所以需要繼代產(chǎn)生大量中間繁殖體再進行再分化培養(yǎng)產(chǎn)生植株。
傳代培養(yǎng)是指需要將培養(yǎng)物分割成小的部分,重新接種到另外的培養(yǎng)器皿(瓶)內,再進行培養(yǎng)的過程。對單層培養(yǎng)而言,80%匯合或剛匯合的細胞是較理想的傳代階段。
傳代方法:
1、懸浮生長細胞傳代
多采用離心法傳代。1000轉/分,20-30秒后去上清。沉淀細胞加新培養(yǎng)液后再混勻傳代。亦有直接傳代法,即懸浮細胞沉淀在瓶壁時,將上清培養(yǎng)液去除1/2-1/3,然后用吸管直接吹打形成細胞懸液再傳代。
2、半懸浮生長細胞傳代(Hela細胞)
此類細胞部分呈現(xiàn)貼壁生長現(xiàn)象,但貼壁不牢,可用直接吹打法使細胞從瓶壁脫落下來,進行傳代。
3、貼壁生長細胞傳代
采用酶消化法傳代。常用的消化液有0。25%的胰蛋白酶液。
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