McAb(單克隆抗體)親和層析柱純化
重組人α干擾素作為一種具有廣譜抗病毒、抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子新型藥物，已在國(guó)內(nèi)外廣泛投入臨床應(yīng)用，并取得了顯著的療效。國(guó)際上對(duì)用于臨床的重組干擾素的純度要求很高，美國(guó)NIH規(guī)定必須在90%以上，因此生產(chǎn)者普遍采用親和層析純化法。我們研制了rHuIFN-α2a的
McAb 3F1，與CNBr活化的Sepharose
4B交聯(lián)制成親和層析柱，經(jīng)1年60余次較大規(guī)模試用表明具有較理想的親和層析純化rHuIFN-α2a的性能，達(dá)到了國(guó)內(nèi)外同類McAb的水平。由于
McAb 3F1也能和rHuIFN-α2b結(jié)合，故極有可能亦適用于rHuIFN-α2b的親和層析純化。
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一、性能指標(biāo)
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1.McAb的特性：IgG1，間接ELISA效價(jià)10-7，對(duì)rHuIFN-α2a具中和活性。
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2.洗脫的rHuIFN-α2a純度：>90%。
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3.洗脫的rHuIFN-α2a比活性：≥1×109IU/mg。
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4.rHuIFN-α2a的回收率：≥95%。
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5.親和柱的穩(wěn)定性：4℃操作和保存情況下，使用60余次1年時(shí)間性能無(wú)明顯下降。
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6.與國(guó)外McAb比較：各項(xiàng)指標(biāo)絕不亞于英國(guó)Celltech公司生產(chǎn)的McAb NK2。
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二、操作方法
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1.rHuIFN-α2a的粗提：表達(dá)rHuIFN-α2a的工程菌用鹽酸胍裂解，過DEAE凝膠柱粗提，收集活性峰。
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2.親和層析：rHuIFN-α2a粗提物用pH7.2，0.15mol/L PBS透析過夜，上樣于經(jīng)pH7.2，0.15mol/L
PBS平衡的親和層析柱，流速0.5ml/分，然后用大量PBS流洗至流出液OD280≤0.02，再用pH2.4，0.1mol/L甘氨酸-HC1洗脫，洗脫液立即轉(zhuǎn)至pH7.2，0.15mol/LPBS中透析過夜，測(cè)定蛋白濃度、純度和活性。
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三、保存方法
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1.親和柱的再生：先后用10個(gè)柱床體積、含0.5mol/L NaCl的pH8.5，0.1mol/L Tris-HCl和pH4.5，0.1mol/L醋酸鈉緩沖液流洗親和柱，再用pH7.2，0.15mol/L PBS充分平衡。
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2.貯存：加入1/萬(wàn)的疊氮鈉防腐，貯存于4℃冰箱。
