空氣微生物采樣器（一）
? ?當(dāng)人的呼吸道由于寒冷、緊張、勞累等因素而出現(xiàn)抵抗力下降時，空氣中的微生物就會乘虛而人，引起呼吸道疾病，如流感、白喉、感冒、支氣管炎、肺炎等。當(dāng)你的皮膚出現(xiàn)破損、傷口等時，空氣中的微生物也會侵入皮膚，造成皮膚感染．如癤、癰或腳癬等?？諝庵械哪承┱婢€是哮喘的罪魁禍?zhǔn)住?br>
? ? 國內(nèi)外大量研究或果表明，在室內(nèi)外的不同環(huán)境中，空氣微生物的污染對人體健康可能造成直接或間接的危害，已經(jīng)成為目前重要的公共環(huán)境衛(wèi)生問題之一。為了控制空氣微生物的污染，必須對空氣微生物進(jìn)行采集，并鑒別微生物的種類和計算菌落數(shù)。
? ? (一)空氣微生物的采樣和分析方法
? ? 1．空氣微生物的采樣方法
? ? 空氣微生物采樣器的研究已經(jīng)有l(wèi) 00多年的歷史，不僅發(fā)展迅速．而且種類繁多。按采樣原理不同大致可分為：過濾式、撞擊式、離心式和液體沖擊式采樣器。以上各種采樣器都必須吸引空氣進(jìn)入采樣器，才能收集空氣微生物。目前國際上公認(rèn)的定量采樣方法是撞擊式空氣微生物采樣器，其中安德森采樣器是通用的測定空氣細(xì)菌和真菌粒子濃度的標(biāo)準(zhǔn)儀器。
? ? 按使用上的可移動性能不同可分為固定式、便攜式和個體采樣器三種式樣。固定式采樣器主要用于室外采集空氣過敏源；便攜式采樣器廣泛用于室內(nèi)環(huán)境中微生物污染調(diào)查研究和例行采樣；個體采樣器是一類體積很小的袖珍式采樣器，可以佩戴在人體上，利用過濾作用或撞擊原理收集空氣微生物，監(jiān)測人們活動過程中的個體接觸量。
? ? 另外，還有一稱“平皿法”的空氣微生物采樣方法，它是利用微粒的重力沉降和慣性過程的組合作用，將空氣微生物收集在半固態(tài)的營養(yǎng)培養(yǎng)基上，所以也稱為“自然沉降法”或“重力采樣器”。這種采樣方法操作簡單，但平板在空氣中暴露5 min時，僅收集到很薄(≤10 cm)的空氣層中的粒子，采樣數(shù)據(jù)不具有代表性。加上采樣效率受風(fēng)速、風(fēng)向和攜帶微生物的粒子大小等影響很大，在定性和定量上缺乏準(zhǔn)確性。
? ? 2．空氣微生物的分析方法
? ? 空氣微生物的分析方法分為兩大類：即培養(yǎng)方法和非培養(yǎng)直接計數(shù)方法。
? ? (1)培養(yǎng)方法? 培養(yǎng)方法是將采集到的活的空氣微生物，在半固態(tài)的營養(yǎng)培養(yǎng)基上經(jīng)過培養(yǎng)繁殖生成菌落，用目視鑒別和計數(shù)，其結(jié)果用“菌落數(shù)”(C FU)表示。培養(yǎng)方法只能測定經(jīng)過培養(yǎng)能夠繁殖的微生物。在選定的培養(yǎng)條件下，可培養(yǎng)的微生物僅是選定培養(yǎng)部分活的微生物．而不是全部活的微生物都能夠培養(yǎng)生長成菌落。培養(yǎng)方法的影響因素有：微生物活性、培養(yǎng)介質(zhì)、培養(yǎng)條件，以及不同微生物：之間的相互作用。
? ? 空氣微生物計數(shù)的準(zhǔn)確度主要是受平板上菌落的大小和平板上菌落表面密度的影響。在標(biāo)準(zhǔn)平板上，范圍在30~300CFU比較合適。菌落數(shù)太少不具有代表性，缺乏統(tǒng)計學(xué)意義；菌落數(shù)太多，計數(shù)非常困難。
? ? 因此，用培養(yǎng)方法分析樣品，必須根據(jù)采樣目的和空氣環(huán)境類型，選擇適當(dāng)?shù)牟蓸訒r間，使每一個樣品都收集到足夠的帶菌粒子是非常重要的，以保證采樣結(jié)果在統(tǒng)計學(xué)上具有顯著性和代表性。因為塑料培養(yǎng)皿上的靜電電荷的吸附作用，在撞擊式采樣器中，使用塑料培養(yǎng)皿會引起收集效率降低20％，所以一般應(yīng)選用標(biāo)準(zhǔn)玻璃培養(yǎng)皿。
? ? (2)非培養(yǎng)直接計數(shù)方法? 非培養(yǎng)直接計數(shù)方法是在采樣后的樣品不經(jīng)過培養(yǎng)就可進(jìn)行微生物鑒別和計數(shù)的方法，不要求微生物能否培養(yǎng)，所有的微生物粒子，包括死的或活的，凡是使人致病的全部微生物粒子都應(yīng)當(dāng)計數(shù)。因此，直接計數(shù)方法測出來的微生物數(shù)量往往比培養(yǎng)方法的高得多。
? ? 目前，使用的幾種直接計數(shù)方法儀器有：光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡、掃描電子顯微鏡和流通式血球計等。采用顯微鏡計數(shù)，在六級安德森采樣器收集到高至40000～50000CFU范圍內(nèi)仍可計數(shù)。非培養(yǎng)直接計數(shù)方法中，掃描電子顯微鏡比光學(xué)顯微鏡的分辨率高，計數(shù)也比較準(zhǔn)確．但設(shè)備價格較高。
? ? 3．選用采樣器的基本原則
? ? 如何選用空氣微生物采樣器的問題，在一般情況下，主要從空氣微生物采樣器性能、采樣目的和空氣環(huán)境類型來考慮。
? ? (1)采樣器性能? 不同種類空氣微生物采樣器的性能也有較大的差異，采集空氣微生物有一個最佳效率范圍。在一般情況下，空氣微生物采樣器采集小粒子都有很高的效率。但是，表面空氣微生物采樣器(SAS)、孢子采樣器和離心式采樣器，采集小粒子效率卻很低。
? ? 室內(nèi)空氣微生物污染的程度是衡量室內(nèi)空氣質(zhì)量好壞的重要參數(shù)之一，要求空氣微生物采樣器，必須具有獲得最大的采樣效率，以確保采集到的空氣微生物在統(tǒng)計學(xué)上有顯著性和代表性。將空氣微生物收集在半固態(tài)的營養(yǎng)培養(yǎng)基上的撞擊式采樣器，采樣濃度一般不應(yīng)超過105 CFU／m3，否則會發(fā)生超載現(xiàn)象。同時，要求采樣器的空氣采樣流量要穩(wěn)定，這樣才能確保采樣性能穩(wěn)定可靠。如果使用非恒流型采樣器采樣時，必須經(jīng)常校準(zhǔn)空氣采樣流量。
? ? 在住宅、辦公室、學(xué)校等一般生活、工作和學(xué)習(xí)場所，進(jìn)行室內(nèi)空氣質(zhì)量評價、研究空氣細(xì)菌污染與在室內(nèi)人數(shù)、勞動強(qiáng)度、通風(fēng)量以及污染源的關(guān)系時，可考慮選用將空氣微生物收集在半固態(tài)的營養(yǎng)培養(yǎng)基上的撞擊式采樣器。如安德森采樣器和恒流撞擊式采樣器，既能夠反映出空氣微生物的污染水平，又能夠定出可吸人與非可吸人粒子上攜帶的微生物濃度，評價其粒度分布狀況及潛在的致病危害程度。在測定空氣過敏原的活性時，可選用濾膜式空氣采樣器。另外，還應(yīng)當(dāng)從測定微生物所用的分析方法來考慮選擇采樣器，每一種分析方法都有具一定的局限性。
? ? 在實(shí)際的采樣應(yīng)用中，往往不能確切預(yù)知有關(guān)的空氣微生物的種類和濃度的情況下，這時可考慮用多種采樣器及多種分析方法聯(lián)合測定。例如，在廢物處理場所測定空氣細(xì)菌、真菌和酵母，研究空氣亍虧染與環(huán)境因素的關(guān)系時，可采用全玻璃三級沖擊采樣器、安德森采樣器和濾膜式空氣采樣器，聯(lián)合采樣測定空氣微生物的種類和濃度。
? ? (2)采樣的目的? 應(yīng)依據(jù)采樣目的來選用空氣微生物采樣器。例如，僅僅要求測定空氣中的細(xì)菌總數(shù)，還是要求測定各種活的空氣微生物，或者要求測定所有的微生物粒子，或者還需要進(jìn)一步了解空氣中攜帶微生物的微粒粒度大小的分布狀態(tài)。根據(jù)上述各種采樣目的，確定選用將空氣微生物收集在液體介質(zhì)中、固態(tài)培養(yǎng)基上或者濾膜上的空氣微生物采樣器。
? ? (3)空氣環(huán)境類型? 測試結(jié)果證明，不同的環(huán)境空氣類型，在不同位置(有無污染源)、時間、季節(jié)和氣候狀態(tài)下，待采集的空氣微生物在種類和污染程度上有很大差異。空氣微生物粒度大小不一，差異也很大。細(xì)菌在0.5～1.0μm，真菌在3～100μm，許多真菌孢子粒徑在1～5μm，病毒則為0.01～0.1μm。
? ? 在室內(nèi)空氣中帶菌的可吸人粒子數(shù)((CFU／m3)可占50％～90％?？諝馕⑸镂廴緡?yán)重時，應(yīng)當(dāng)考慮不容易或者不會發(fā)生超載的采樣器。
? ? (二)過濾式微生物采樣器
? ? 過濾式空氣微生物采樣器，是世界上應(yīng)用最早的空氣采樣技術(shù)之一。大約在20世紀(jì)30年代末，美國人采用纖維薄膜作為過濾材料，所以也稱為濾膜過濾式采樣器。這種采樣器可以單獨(dú)使用，也可以與其他采樣器聯(lián)合使用．廣泛用于室內(nèi)外環(huán)境中空氣微生物污染的調(diào)查研究和例行采樣。具有采樣靈敏度高、采樣效率高、使用范圍廣等特點(diǎn)。
? ? 1．采樣原理和儀器結(jié)構(gòu)
? ? (1)采樣的原理? 過濾式空氣微生物采樣器采樣的工作原理，不僅是能阻攔大于濾膜孔徑的微生物粒子，而且通過慣性撞擊、擴(kuò)散、重力沉降和靜電吸附作用能捕集生物小粒子，所以其阻留效率高。儀器工作時，由抽氣泵抽取待測環(huán)境中一定量的空氣，空氣中的生物粒子被阻留在濾膜上。將濾膜貼在固體培養(yǎng)基上，在適宜的溫度下，濾膜上的微生物在培養(yǎng)基上生長成菌落，按照采樣時間和采樣空氣流量計算出空氣微生物粒子濃度。
? ? (2)采樣器結(jié)構(gòu)? 單機(jī)過濾式空氣微生物采樣器的總體結(jié)構(gòu)，主要分為采樣裝置、抽氣和流量計測裝置及支架三大部分。采樣中使用的泵，一般為恒流泵，可以用干電池作為抽氣動力源，使用起來非常方便。依據(jù)所使用的濾料不同，過濾式空氣微生物采樣器可分為濾紙? 空氣微生物采樣器和濾膜空氣微生物采樣器。
? ? 濾紙空氣微生物采樣器。在采樣夾里放置定量濾紙或玻璃纖維濾紙等作為濾料。濾? 紙是多孑L性的，孑L的結(jié)構(gòu)彎曲?？讖?μm多孔性濾紙空氣微生物采樣器在收集0.3μm的細(xì)? 菌微粒時．采樣效率不小于95％。
? ? 濾膜空氣微生物采樣器。在采樣夾里放置聚碳酸酯核孔薄膜作為濾料。濾膜中孔的? 結(jié)構(gòu)是直孔，通常使用的孔徑為0.35～0.5 0／μm，孔徑大小一致性好。采樣效率主要取決于? 濾膜孔徑大小?？讖綖?.60／μm濾膜采樣器的采樣效率，相當(dāng)于孔徑為5μm濾紙空氣采樣? 器的采樣效率。另外，濾膜表面光滑，比濾紙更有利于分析測定。濾膜過濾器收集的霉菌和放線菌的孢子，用電子掃描顯微鏡計數(shù)。
? ? 2．儀器技術(shù)指標(biāo)和要求
? ? 空氣采樣器的技術(shù)指標(biāo)應(yīng)符合下列要求：采樣效率應(yīng)接近l 00％；空氣采樣流量：便攜式濾膜采樣器恒流流量為0.5L／min、1.0L／min、2.0L／mi n；大流量濾膜式采樣器流量1 m3／min；濾膜孔徑：聚碳酸酯核孔薄膜孔徑常用0.35～0.50／μm。
? ? 3．采樣和測定具體步驟
? ? (1)安裝與消毒? 將選擇好的濾膜安裝在采樣夾里，并認(rèn)真檢查安裝是否合乎要求，然? 后用紫外線(UV)將濾膜和采樣夾進(jìn)行消毒。
? ? (2)進(jìn)行采樣? 過濾式空氣采樣器的空氣采樣流量準(zhǔn)確程度直接影響采樣結(jié)果，在采樣? 前應(yīng)用皂膜流量計校準(zhǔn)采樣泵的流量。將采樣夾用真空管與便攜式恒流采樣泵連接，啟動采? 樣泵進(jìn)行采樣。
? ? (3)細(xì)菌培養(yǎng)和計數(shù)
? ? 直接計數(shù)法? 采樣完畢后，采用非培養(yǎng)方法分析，即樣品不經(jīng)過培養(yǎng)，就鑒別和計? 數(shù)收集在濾料上的微生物。
? ? 細(xì)菌培養(yǎng)法? 采樣完畢后，取下濾膜，直接放在培養(yǎng)基上培養(yǎng)，或者用聚山梨醇酯80溶液將微生物洗脫下來，懸浮于液體中，逐級：進(jìn)行稀釋，接種平板后培養(yǎng)，計數(shù)菌落數(shù)。
? ? 4．采樣結(jié)果計算
? ? (1)采樣完畢后，采用非培養(yǎng)法分析；或者將濾膜取下直接放在培養(yǎng)基上培養(yǎng)，計數(shù)菌? 落數(shù)，求出單位體積(m3)空氣中的菌落數(shù)，以CFU／m3報告測定結(jié)果。空氣中的菌落數(shù)? 可用式(6—5)計算：
? ? C—l000 N/FQt? ? ? ? ?(6-5)
? ? 式中，C為空氣中的菌落數(shù)，CFU／m3；N為計數(shù)平板上的菌落數(shù)。CFU；F為平板或? 濾膜分量；Q為采樣流量，L／min；t為采樣時間，min。
? ? (2)采樣完畢后，用聚山梨醇酯80溶液將濾膜上的微生物洗脫下來，懸浮于液體中，? 逐級進(jìn)行稀釋，接種平板后培養(yǎng)，求出單位體積(ITl3)空氣中的菌落數(shù)，以CFU／m3報告? 測定結(jié)果。空氣中的菌落數(shù)可用式(6—6)計算：
? ? C—1000?VN／FQt? ? ? ? ? (6—6)
? ? 式中，C為空氣中的菌落數(shù)，CFU／m3；f為溶液稀釋因子；V為最終溶液體積，mL；? N為計數(shù)平板上的菌落數(shù)，CFU；F為平板或濾膜分量；Q為采樣流量，L／min；t為采樣? 時間，min。
? ? (三)撞擊式采樣器
? ? 撞擊式采樣器是一種先進(jìn)的空氣微生物采樣儀器，在采樣和測定空氣微生物濃度方面具有準(zhǔn)確性和可靠性。國際微生物會議和美國政府工業(yè)衛(wèi)生學(xué)家協(xié)會推薦為標(biāo)準(zhǔn)空氣微生物采樣器，也是應(yīng)用最廣泛的空氣微生物采樣器。
? ? 1．采樣原理和儀器結(jié)構(gòu)
? ? (1)采樣原理? 安德森撞擊式采樣器是利用微粒的慣性撞擊作用，直接將空氣微生物收集于半固態(tài)的營養(yǎng)瓊脂表面上，采樣后可直接進(jìn)行培養(yǎng)、計數(shù)，測定出每立方米空氣中所含的微生物菌落數(shù)(CFU／m3)。
? ? 撞擊式采樣器采集空氣中的粒子上攜帶的活細(xì)菌和真菌，在半固態(tài)的營養(yǎng)培養(yǎng)基上或者黏附表面上，其理論依據(jù)是微粒慣性撞擊原理。依據(jù)慣性撞擊原理收集微粒的采樣原理采樣時，當(dāng)微粒隨著有一定流速的氣流通過圓孔小噴孔后，粒徑較大的微粒具有足夠大的慣性時，就會做慣性運(yùn)動，并會離開氣流，撞擊于瓊脂表面上被收集下來；較小的未撞擊的微粒，慣性小的就會隨著氣流(箭頭指引的方向)運(yùn)動被帶走，然后進(jìn)人次一級。
? ? (2)儀器結(jié)構(gòu)? 安德森撞擊采樣器是一種多孔撞擊式空氣微生物采樣器，在實(shí)際空氣微生物采樣中采用的有：八級安德森撞擊采樣器、六級安德森撞擊采樣器、二級安德森撞擊采樣器和一級安德森撞擊采樣器，常用的是前三者。
? ? 八級安德森撞擊采樣器。八級安德森撞擊采樣器是一個多級，多孔的階式撞擊采樣器．用于大氣中的顆粒物分級采集，分析質(zhì)量濃度和粒徑分布。撞擊采樣器根據(jù)空氣動力學(xué)原理設(shè)計，由8個撞擊盤組成，每個撞擊盤具有數(shù)量和直徑經(jīng)過嚴(yán)格設(shè)計的加速噴射小孔。
采樣氣流經(jīng)過每一級撞擊盤時，其中較大的顆粒由于慣性作用，直接撞擊并停留在撞擊盤的表面，而較小的顆粒則隨空氣流穿過，到達(dá)下一級撞擊盤。不同空氣動力學(xué)粒徑的氣溶膠粒子根據(jù)空氣動力學(xué)原理被分離并采集到各級采樣膜上，膜片用于重量和顆粒物成分分析。
? ? 六級安德森撞擊采樣器。六級安德森撞擊采樣器是由六個撞擊器組合成一體，每一級實(shí)際是一個單級采樣器，利用6次反復(fù)撞擊原理，絕大部分粒子特別是在氣管及肺沉降的粒子基本都撞擊下來，因而它采集到的粒子大小范圍自然比單級的廣，這是一些單級撞擊采樣器所無法比擬的。六級空氣微生物采樣器模擬人呼吸道的解剖結(jié)構(gòu)和空氣動力學(xué)生理特征，采樣慣性撞擊原理而將懸浮在空氣中的微生物粒子分等級地收集到采樣介質(zhì)表面上，然后供培養(yǎng)及微生物學(xué)分析。六級安德森空氣微生物采樣器整個儀器是由撞擊器、主機(jī)(流量計)、定時器、三腳架組成。
? ? 二級安德森撞擊采樣器。二級安德森撞擊采樣器是改進(jìn)型采樣器，適用于室內(nèi)外環(huán)境空氣微生物污染調(diào)查研究和例行采樣．如醫(yī)院、生物潔凈室和工業(yè)中微生物污染的檢測和評價。二級安德森撞擊采樣器依據(jù)微粒慣性撞擊原理，能夠測定出空氣中所含的微生物濃度，反映出空氣微生物污染水平，又可測出可吸人與非可吸人粒子上攜帶的微生物濃度，評價其粒度分布狀況及潛在的致病危害程度。二級安德森撞擊采樣器設(shè)有空氣采樣流量自動控制裝置。當(dāng)所用的真空泵的采樣負(fù)壓≥0047 MPa時，采樣流量就可達(dá)到28.3 L／mi n。不需使用調(diào)節(jié)閥門和流量計等部件，一般情況下不需要校準(zhǔn)，從而提高了采樣結(jié)果的可靠性。與八級、六級安德森撞擊采樣器相比，使用平板數(shù)量少，結(jié)構(gòu)比較簡單。
? ? 一級安德森撞擊采樣器。一級安德森撞擊采樣器是有400個孔的單級空氣采樣器，適用于測定每立方米空氣中所含的微生物菌落，}基數(shù)(C FU／m3)。1987年，在國際生物氣溶膠會議上，美國政府工業(yè)衛(wèi)生學(xué)家協(xié)會(ACGI H)將一級安德森撞擊采樣器推薦為室內(nèi)空氣微生物采樣器。一級安德森撞擊采樣器沒有穩(wěn)流控制系統(tǒng)，需要使用調(diào)節(jié)閥門和流量計等部件，調(diào)節(jié)采樣器的空氣采樣流量達(dá)到28.3L／mi n。
? ? 2．儀器檢定和校準(zhǔn)要求
? ? 一級、六級和八級安德森撞擊采樣器在用于采樣之前，需要使用調(diào)節(jié)閥門和流量計等部件，調(diào)節(jié)采樣器的空氣采樣流量達(dá)到28.3 L／mi n。為了提高采樣結(jié)果的可靠性，必須經(jīng)常使用標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)裝置(干氣體流量計)校準(zhǔn)空氣采樣流量。只要采樣器的空氣采樣流量達(dá)到28.3 L／mi n，采樣器的收集效率就會不小于9 5％。
? ? 二級安德森撞擊采樣器設(shè)有恒流裝置，只需要真空泵的采樣負(fù)壓≥0．047 MPa時，采樣流量就可達(dá)到28.3 L／min。因此，對于二級安德森撞擊采樣器，需要監(jiān)控真空泵的采樣負(fù)壓是否符合設(shè)計要求。只要負(fù)壓達(dá)到設(shè)計要求，采樣器的收集效率就會不小于95％。
? ? 3．采樣和測定操作步驟
? ? 各種安德森撞擊采樣器，主要是所使用的營養(yǎng)瓊脂平板數(shù)量不同，在采樣和測定操作步驟上稍有差異。這里僅介紹六級安德森撞擊采樣器的采樣和測定操作步驟，其他的安德森撞擊采樣器可以參照操作。
? ? (1)采樣器的裝配
? ? 移去營養(yǎng)瓊脂平板皿蓋，將一個營養(yǎng)瓊脂平板放置于采樣器底座的3個圓柱支子上，將第六級圓盤小心蓋在平板上，再將第二個營養(yǎng)瓊脂平板放置于采樣器底座的3個圓柱支子上。按照這樣的方法，連續(xù)將所有6個平板裝入采樣器內(nèi)，再小心將人口頂蓋蓋在第一級上。所有的平板在裝人采樣器內(nèi)之前應(yīng)當(dāng)維持在室溫狀態(tài)。
? ? 裝配完畢后，將底座上的出口接頭連接到真空泵或其他抽真空源上。
? ? (2)進(jìn)行采樣操作
? ? 依據(jù)空氣環(huán)境的類型和采樣目的，采樣時間選擇在數(shù)分鐘至30 mi n范圍內(nèi)某一數(shù)值為宜。使每一個樣品都收集到足夠的帶菌粒子是很重要的，以便能夠保證采樣結(jié)果在統(tǒng)計學(xué)上具有顯著性和代表性。然后每個平板上，菌落數(shù)超過300 CFU，會造成計數(shù)困難。采樣時間也不宜超過30min，否則營養(yǎng)瓊脂平板上的水分損失而影響細(xì)菌活性。
? ? 按動真空泵開關(guān)到“ON”位置，采樣工作開始，采樣氣流通過采樣器。關(guān)閉真空泵開關(guān)，記錄采樣時間以及采樣點(diǎn)的氣溫、大氣壓力和相對濕度。
? ? (3)樣品保存? 采樣完畢后，從采樣器中取出營養(yǎng)瓊脂平板，蓋上皿蓋；做好記錄，分別標(biāo)出樣品號和級別號，如l—1、1—2、1—3、…。
? ? (4)細(xì)菌培養(yǎng)? 樣品培養(yǎng)后，用標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌菌落計數(shù)器，計數(shù)每一個平板上的菌落數(shù)，也可以用¨陽性孑L計數(shù)方法”，計數(shù)平板上的菌落數(shù)，然后用平板上的菌落數(shù)的數(shù)值，在“400孔采樣器陽性孔修正表”中查出對應(yīng)的修正后的菌落數(shù)。
? ? (5)結(jié)果計算
? ? 菌落總數(shù)。每次采樣，將6個平板上的菌落數(shù)的總和除以空氣采樣體積，可求出每立方米(m3)空氣中的菌落數(shù)，以CFU／m3報告結(jié)果。其中空氣采樣體積等于空氣采樣流量乘以采樣時間?？諝庵械木鋽?shù)可用式(6—7)計算：
? ? C一1000(N1+N2+N3+N4+N5+N6)／28.3 t? ? ? ? ? ? ? (6—7)
? ? 式中，C為空氣中的菌落數(shù)，CFU／m3；Nl～N6分別為第一級至第六級平板上修正后的菌落數(shù)，CFU；2 8.3為空氣采樣流量，L／min；t為采樣的時間，min。
? ? 各級菌落數(shù)的比例。在六級安德森撞擊采樣器中，將第一級平板上的菌落數(shù)除以6個平板上的菌落數(shù)總和，可求出第一級平板上的菌落數(shù)所占的比例，用％表示，其余類推。
? ? (四)恒流撞擊式采樣器
? ? 恒流撞擊式空氣微生物采樣器，是根據(jù)我國室內(nèi)空氣微生物檢測的實(shí)際狀況，設(shè)計制作的一種兩級多孔撞擊式采樣器。使用90 mm標(biāo)準(zhǔn)玻璃培養(yǎng)皿，符合空氣細(xì)菌總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法的要求，測定出每立方米空氣中所含的細(xì)菌和真菌的菌落數(shù)，同時測定出空氣中帶菌的可吸人與非可吸人粒子的濃度。這種采樣器具有采樣靈敏度高、操作簡便、裝卸方便、壽命較長、噪聲較低、自控恒流、自控關(guān)泵等優(yōu)點(diǎn)。
? ? 1．采樣原理和儀器結(jié)構(gòu)
? ? (1)采樣原理? 恒流撞擊式空氣微生物采樣器的采樣原理，與安德森撞擊采樣器一樣，是依據(jù)微粒慣性撞擊原理設(shè)計的。將空氣中攜帶的活細(xì)菌和真菌粒子采集在半固態(tài)的營養(yǎng)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后計數(shù)，用每立方米空氣中所含的微生物菌落數(shù)(CFU／m3)報告結(jié)果。
? ? 恒流撞擊式空氣微生物采樣器是兩級采樣器，第一級的噴孔直徑必須比第二級的大，氣體流速則比第二級的小。控制空氣采樣流量恒定在30 L／min。采樣時，在采樣器第一級的氣體流速V0下，較大粒子就有足夠大的慣性而做慣性運(yùn)動，離開氣流撞擊在第一級瓊脂表面上被收集下來；較小的未撞擊的微粒隨氣流進(jìn)人第二級被收集在營養(yǎng)瓊脂平板上。由此，就能把帶菌的可吸人和非可吸人微粒有效地分開。
? ? 第一級采集空氣中非可吸人粒子上攜帶的活細(xì)菌和真菌等微生物，第二級采集可吸人粒子上的微生物，分別給出每立方米空氣中所含的細(xì)菌和真菌的菌落數(shù)(CFU／m3)。用這種采樣器不僅反映出空氣微生物污染水平，而且又可評價空氣中攜帶微生物的可吸人與非可吸人粒子的分布狀況及其潛在的致病危害程度。
? ? (2)采樣器的結(jié)構(gòu)? 恒流撞擊式空氣微生物采樣器包括兩級撞擊式采樣器、流量控制系統(tǒng)、真空泵和智能雙數(shù)顯控制器等部件，恒流撞擊式采樣器的結(jié)構(gòu)組成。恒流撞擊式采樣器空氣采樣流量為30L／min，兩級撞擊式采樣器由鋁合金底座、有200個圓形小噴孔的第一級和第二級圓盤、頂蓋及3個帶螺釘不銹鋼固定桿組成。
? ? 2．培養(yǎng)基及平板制備? ?
? ? (1)培養(yǎng)基制備? 空氣細(xì)菌測定的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基成分和制備方法如下：蛋白胨10 g、牛肉浸膏3g、氯化鈉5 g、瓊脂15～20 g、蒸餾水l000 L混合后加熱溶解，校正至pH 7.4，過濾分裝，以20 mi n的時間采用l21高壓滅菌。也可以根據(jù)用戶要求采用其他培養(yǎng)基成分制備平板。
? ? (2)平板的制備? 空氣中細(xì)菌的測定所用平板的制備，按照《室內(nèi)空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》(GB／Tl8883一2002)中附錄D的方法，移取20 mL的45～50滅菌營養(yǎng)瓊脂，加人90 cm無菌玻璃培養(yǎng)皿內(nèi)。制備成瓊脂平板，蓋上皿蓋。
? ? 3．采樣和測定步驟
? ? (1)采樣時間和顯示設(shè)定? 在采樣操作之前，首先需要設(shè)定采樣時間長短及其顯示方式。我國生產(chǎn)的恒流撞擊式空氣微生物采樣器。多數(shù)配備智能雙數(shù)顯控制器，具有自控關(guān)泵的功能。在正常工作時，它能夠顯示采樣時間和設(shè)定值，采樣自動計時，當(dāng)運(yùn)行時間達(dá)到設(shè)定值，自動關(guān)閉真空泵，停止采樣。
? ? (2)采樣器的裝配
? ? 打開營養(yǎng)瓊脂平板皿蓋，將一個營養(yǎng)瓊脂平板放置于底座的3個圓柱支子上。將第二級圓盤小心蓋在底座上，將另一個營養(yǎng)瓊脂平板放置于第二級圓盤上部的．3個圓柱支子上，小心蓋上第一級．再小心蓋上頂蓋。將3個固定桿豎起，將螺釘對準(zhǔn)頂蓋上部環(huán)狀槽，順時針輕輕旋緊。
? ? 將真空軟管連接于底座的排氣口接頭上，另一端連接到真空泵進(jìn)氣口接頭上。采樣氣流從頂蓋上進(jìn)氣口的方向吸人采樣器，然后從底座接頭上的排氣口指示的方向排出真空泵。
? ? (3)進(jìn)行空氣采樣? 按動復(fù)位鍵或重新接通電源，此時電源POW指示燈和輸出OU T指示燈交替閃爍．表明采樣開始。采樣運(yùn)行時間達(dá)到規(guī)定時間，OU T指示燈自動熄滅，真空泵自動關(guān)閉，停止采樣。采樣完畢后，記錄采樣時間、采樣點(diǎn)氣溫、大氣壓力和相對濕度。
? ? (4)樣品保存? 將3個固定桿的螺釘反時針旋松離開頂蓋環(huán)狀槽，移去頂蓋和第一級圓盤，取出第一級的營養(yǎng)瓊脂平板．蓋上皿蓋。在皿蓋上分別標(biāo)出樣品號和級別號，做好記錄，例如標(biāo)出1-1、1-2；2-1、2-2等。
? ? (5)細(xì)菌培養(yǎng)? 為了預(yù)防冷凝水珠出現(xiàn)，將平板翻轉(zhuǎn)倒置于培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，測定在36±1下培養(yǎng)48 h的細(xì)菌數(shù)；真菌最佳培養(yǎng)溫度在20～25；或者根據(jù)采樣目的選擇適當(dāng)?shù)臏囟扰囵B(yǎng)。
? ? (6)樣品培養(yǎng)后，用標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌菌落計數(shù)器．計數(shù)每一個平板上的菌落數(shù)，也可以用“陽性孔計數(shù)方法"，計數(shù)平板上的菌落數(shù)，然后用平板上的菌落數(shù)的數(shù)值，在“200孔采樣器陽性孔修正表”中查出對應(yīng)的修正后的菌落數(shù)。
? ? (7)結(jié)果計算
? ? 菌落總數(shù)。每次采樣，將6個平板上的菌落數(shù)的總和除以空氣采樣體積，可求出每立方米(m。)空氣中的菌落數(shù)，以CFU／m3報告結(jié)果。其中空氣采樣體積等于空氣采樣流量乘以采樣時間。空氣中的菌落數(shù)可用式(6—8)計算：
? ? C一1000(N1+N2)／30t? ? ? ? (6-8)
? ? 式中，C為空氣中的菌落數(shù)，CFU／m3；Nl、N2分別為第一級舌第二級平板上修正后的菌落數(shù)，CFU；3 0為空氣采樣流量，L／min；t為采樣的時間，mi n。
? ? 可吸人菌落數(shù)的比例。在六級安德森撞擊采樣器中，將第一級平板上的菌落數(shù)除以2個平板上的菌落數(shù)總和，可求出空氣中可吸人粒子上的微生物所占的比例，用％表示。
