AWWA WQTC55150
檢測水源或成品水中傳染性腸道病毒的分子方法

Molecular Methods for the Detection of Infectious Enteroviruses in Source or Finished Waters

標準號

AWWA WQTC55150

發(fā)布

1970年

發(fā)布單位

SCC

當前最新

AWWA WQTC55150

 

 

適用范圍

環(huán)境或水源水樣，甚至成品飲用水樣，可能含有可通過 PCR 和 RT-PCR 等分子方法檢測的病毒顆粒。這些方法與確認分析（例如核酸雜交或核苷酸測序）相結合，可用于確定水中是否存在病毒，即使病毒含量非常低。然而，這些測試并不能最終確定病毒是否具有傳染性或非傳染性。目前檢測水樣或濃縮物中傳染性病毒的標準方法是進行兩次傳代細胞培養(yǎng)，以確認細胞病變效應 (CPE)。不會檢測不會引起 CPE 或復制有限的病毒。此外，該程序需要數(shù)周時間，而且成本高昂。通過評估受感染細胞中是否存在病毒核酸，可以獲得細胞培養(yǎng)中無需重復傳代即可復制的證據；然而，需要測試稀釋度才能證明復制。我們已經開發(fā)了分子方法，可以直接確認細胞培養(yǎng)中正義單鏈 RNA 病毒的復制或活力，無論它們是否具有產生 CPE 的能力。具有此類核酸的關鍵腸道病毒病原體包括腸道病毒（柯薩奇病毒、?？刹《竞图顾杌屹|炎病毒）、杯狀病毒、甲型肝炎病毒和戊型肝炎病毒以及星狀病毒。在這些病毒復制期間，會產生互補的負鏈，該負鏈主要與正鏈配對，作為受感染細胞中的復制中間 RNA。檢測到負鏈或含有正鏈和負鏈的雙鏈復制形式 RNA 復合物是病毒復制的證據。我們開發(fā)了 RT-PCR 方法，以柯薩奇病毒 B3 作為模型病毒，檢測受感染培養(yǎng)物中的負鏈或雙鏈形式的病毒 RNA。CVB3 的特異性引物對用于檢測負鏈。通過使用泛腸道病毒引物檢測雙鏈形式，我們已證明在感染后 24 小時內可以檢測到低至 4 個感染單位。我們開發(fā)的方法有望成為快速、靈敏且特異的分子檢測水源水和飲用水供應中傳染性人類腸道病毒的方法。包括 18 篇參考文獻、表格和圖片。

專題

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