ASTM F2149-01
細(xì)胞自動分析的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法.單細(xì)胞懸浮液計(jì)數(shù)和分級的電敏域法

Standard Test Method for Automated Analyses of Cells8212;the Electrical Sensing Zone Method of Enumerating and Sizing Single Cell Suspensions

被代替

標(biāo)準(zhǔn)號

ASTM F2149-01

發(fā)布

2001年

發(fā)布單位

美國材料與試驗(yàn)協(xié)會

替代標(biāo)準(zhǔn)

ASTM F2149-01(2007)

當(dāng)前最新

ASTM F2149-24

 

 

適用范圍

1.1 該測試方法，只要了解其局限性，涵蓋了大多數(shù)細(xì)胞類型的計(jì)數(shù)和尺寸分布的測量程序。該儀器允許用戶選擇細(xì)胞大小設(shè)置，因此，該測試方法不限于特定細(xì)胞類型。該方法適用于懸浮以及貼壁細(xì)胞培養(yǎng) (1)。這是一種定量實(shí)驗(yàn)室方法，不適用于在線或現(xiàn)場使用。結(jié)果可以報(bào)告為每毫升細(xì)胞數(shù)或每體積分析的細(xì)胞懸浮液的細(xì)胞總數(shù)。計(jì)數(shù)和尺寸分布都可以用細(xì)胞微米直徑或體積、飛升來表示。
1.2 常規(guī)分析組織工程醫(yī)療產(chǎn)品(2) 中常用的細(xì)胞。例如軟骨細(xì)胞 (3)、成纖維細(xì)胞 (4) 和角質(zhì)形成細(xì)胞 (5)。 Szabo 等人使用該方法測量胰島數(shù)量和體積 (6)。此外，使用電傳感區(qū)技術(shù)的儀器用于對放入中空纖維盒體外肝臟輔助系統(tǒng)中的豬肝細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和大小分布分析。在本研究 (7) 和其他研究 (6、8) 中，與傳統(tǒng)的手動方法（使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器在顯微鏡下進(jìn)行視覺細(xì)胞計(jì)數(shù)）相比，自動電感應(yīng)區(qū)方法明顯得到驗(yàn)證，具有更高的準(zhǔn)確度和精確度。該驗(yàn)證已在多種細(xì)胞類型中得到證實(shí)。此外，自動化程序快速、堅(jiān)固且具有成本效益；它還最大限度地減少了手動技術(shù)中操作員之間固有的差異。
1.3 該儀器由多家公司制造；然而，所有的原理都是電阻抗。這種用于細(xì)胞計(jì)數(shù)和尺寸測定的測試方法基于對懸浮在導(dǎo)電液體中的細(xì)胞穿過小孔時(shí)產(chǎn)生的電阻變化的檢測和測量（參見（圖1））。當(dāng)細(xì)胞懸浮在導(dǎo)電液體（例如磷酸鹽緩沖鹽水）中時(shí)，它們充當(dāng)離散絕緣體。當(dāng)細(xì)胞懸浮液通過一個(gè)小的圓柱形孔時(shí)，每個(gè)細(xì)胞的通過會改變位于孔兩側(cè)的兩個(gè)浸沒電極之間的電氣路徑的阻抗。每個(gè)細(xì)胞通過孔時(shí)都會產(chǎn)生適用于計(jì)數(shù)和尺寸測定的電脈沖。通過孔徑的路徑（在其中檢測細(xì)胞）被稱為“電子傳感區(qū)”。該測試方法允許通過電子選擇生成的脈沖，對非常窄的尺寸分布范圍內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行選擇性計(jì)數(shù)。雖然脈沖數(shù)表示細(xì)胞計(jì)數(shù)，但產(chǎn)生的電脈沖的幅度取決于細(xì)胞的體積。電極之間的基線電阻是由于孔徑邊界內(nèi)的導(dǎo)電液體的電阻造成的。 “電子傳感區(qū)域”內(nèi)細(xì)胞的存在會增加導(dǎo)電通路的電阻，該電阻取決于細(xì)胞的體積。對孔徑內(nèi)細(xì)胞行為的分析表明，細(xì)胞產(chǎn)生的脈沖高度是最接近與細(xì)胞體積成正比的參數(shù)。
1.4 限制討論如下：
1.4.1 巧合8212;有時(shí)，超過一個(gè)單個(gè)細(xì)胞同時(shí)穿過孔徑。與兩個(gè)單獨(dú)的脈沖相反，僅生成單個(gè)較大脈沖。結(jié)果是細(xì)胞計(jì)數(shù)較低，細(xì)胞體積測量較高。重合頻率是由儀器校正的細(xì)胞濃度的統(tǒng)計(jì)可預(yù)測函數(shù)。這稱為重合校正（8）。通過使用相對較低的細(xì)胞……可以最大限度地減少這種現(xiàn)象，從而確保更高的結(jié)果準(zhǔn)確性。

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