高效液相色譜有幾種定量方法
色譜定量分析是根據(jù)組分檢測(cè)響應(yīng)訊號(hào)的大小，定量確定試樣中各個(gè)組分的相對(duì)含量。其依據(jù)是：每個(gè)組分的量(重量或體積)與色譜檢測(cè)器產(chǎn)生的檢測(cè)響應(yīng)值(峰高或峰面積)成正比。具體到特定方法，主要有下列方法：
1.歸一化法
當(dāng)樣品中所有組分能全部流出色譜柱，并在檢測(cè)器上都能產(chǎn)生相應(yīng)信號(hào)（得到色譜峰）時(shí)，常采用歸一化法。
Ci = mi/m×100％ = fi?Ai /Σ fi?Ai ×100％
* 優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單方便， 不受進(jìn)樣量及操作條件波動(dòng)的影響
* 缺點(diǎn)：所有組分都必須出峰， 每個(gè)組分都必須有校正因子
2.外標(biāo)法（又稱標(biāo)準(zhǔn)曲線法）
配制已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行色譜分析，測(cè)量各組分的峰面積或峰高，作峰面積(或峰高)和濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后在與標(biāo)準(zhǔn)樣品分析相同操作條件下，進(jìn)入相同量(一般為體積)的未知樣品，測(cè)得被分析組分的峰面積（或峰高），在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得相應(yīng)的濃度。
在工廠的日常控制分析中大多數(shù)采用這種方法，分析結(jié)果的準(zhǔn)確性主要取決于進(jìn)樣量的重復(fù)性和操作條件的穩(wěn)定性。
Ci = mi/m×100％ = fiAi/m×100％
* 校正：標(biāo)準(zhǔn)曲線、兩點(diǎn)法、單點(diǎn)法
* 優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便、無(wú)需所有組分都出峰（校正因子），經(jīng)常用于幾個(gè)組分的分析
* 缺點(diǎn)：操作條件波動(dòng)的影響較大,進(jìn)樣量影響大
3.內(nèi)標(biāo)法
由于吸附或化學(xué)反應(yīng)等原因，色譜柱不能使所有的組分都流出來(lái)，或者各組分都能流出，但檢測(cè)器不能對(duì)所有組分都給出相應(yīng)的色譜峰，或者有的樣品含量過(guò)大（得不到完整的峰），或者過(guò)小，或者只要求定量分析復(fù)雜樣品中幾個(gè)組分，均可采用內(nèi)標(biāo)法。
過(guò)程：在總量為m樣品中如入質(zhì)量為mS的內(nèi)標(biāo)物S，然后根據(jù)被測(cè)物和內(nèi)標(biāo)物的重量和在色譜圖上相應(yīng)的峰面積比求出某組分i,的含量
mi/ms = fiAi / fsAs
Ci = mi/m ×100％
= fiAi ms / fsAs m×100％
* 優(yōu)點(diǎn)：不需所有組分都出峰（校正因子），操作條件和進(jìn)樣量基本無(wú)影響
* 缺點(diǎn)：內(nèi)標(biāo)物難找－－穩(wěn)定無(wú)反應(yīng)、結(jié)構(gòu)性能，相似、保留時(shí)間內(nèi)插并完全分離
* 注意：內(nèi)標(biāo)法比較適用于低含量組分的分析， 一般選作內(nèi)標(biāo)物的物質(zhì)，最好在樣品中不存在，其保留值在所有組分保留值的中間，加入內(nèi)標(biāo)物的含量和待測(cè)組分含量不應(yīng)相差很大。
4.疊加法（內(nèi)加法）
內(nèi)加法適用于較特殊的情況：圖譜上沒(méi)有適當(dāng)位置可插入內(nèi)標(biāo)峰，或因各種條件限制無(wú)合適的內(nèi)標(biāo)物時(shí)。
此時(shí)可先以樣品出一張圖，再在樣品中加入一定量被測(cè)組分后再進(jìn)樣，看峰面積增加了多少，由此比例來(lái)求出原始含量。
